在自然懷孕時(shí),通過(guò)性交方式,男性將精液射入陰道內(nèi),經(jīng)過(guò)孵育后,部分具有受精能力的成熟精子穿越宮頸,并通過(guò)宮頸粘液的理化作用,精子獲得授精能力,最終到達(dá)受精部位與卵子相遇并結(jié)合。在人工授精技術(shù)中,宮腔內(nèi)人工授精(IUI)是最常用的授精方式,取代了陰道內(nèi)人工授精(IVI)和宮頸內(nèi)人工授精(ICI),直接將精子注入宮腔。該法繞過(guò)精子在陰道孵育、穿過(guò)宮頸粘液,經(jīng)過(guò)自然篩選的環(huán)節(jié)。為了避免將精漿、非精子成分和劣質(zhì)精子帶入宮腔,影響子宮腔的環(huán)境和受精。因此必須采用醫(yī)療手段,把優(yōu)質(zhì)的精子分離出來(lái),并使精子獲能(受精能力,即使注入子宮腔的精子如同經(jīng)過(guò)宮頸粘液選擇的精子一樣,獲得正常受精能力)。IUI精液處理最常用的方法有上游法和雙層密度梯度離心法,根據(jù)精液中精子的濃度、快速運(yùn)動(dòng)精子的百分比來(lái)選擇采用哪種方法。
一、上游法
上游法是將充分液化的精液加入試管底部,再沿管壁緩慢加入培養(yǎng)液,勿混,以大約45度傾斜放置,共同孵育一段時(shí)間,使活動(dòng)能力好的精子游到上層培養(yǎng)液中,然后收集含精子的上層培養(yǎng)液,離心濃縮,調(diào)節(jié)精子濃度,即可用于IUI。優(yōu)點(diǎn)在于操作簡(jiǎn)便、成本低廉、不良反應(yīng)少,并可獲得更低 DNA 碎片率的精子;缺點(diǎn)是精子回收率相對(duì)低,對(duì)于前向運(yùn)動(dòng)精子總數(shù)少、黏稠或不液化的精液不適宜采用上游法處理。
二、雙層密度梯度離心法
雙層密度梯度離心法是將高濃度梯度液加入離心管底部,在緩慢加入等體積的低密度梯度液,最后將液化好的精液緩慢加到最上層梯度液液面上。注意保持各層之間形成一個(gè)界面。經(jīng)離心,優(yōu)質(zhì)精子沉淀到管底,再用精子培養(yǎng)液洗滌沉淀的精子后,調(diào)整精子濃度,備用。該方法可用于前向運(yùn)動(dòng)精子總數(shù)較少的精液。有研究認(rèn)為,常規(guī)參數(shù)異常的精子經(jīng)該法處理后,得到優(yōu)選精子的頂體反應(yīng)率、低滲腫脹試驗(yàn)陽(yáng)性率和核成熟的精子比例均優(yōu)于上游法。另有研究表明,經(jīng)DNA碎片率檢測(cè)發(fā)現(xiàn),該法處理后的精子DNA完整性明顯高于經(jīng)上游法處理的精子。
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