在自然懷孕時,通過性交方式,男性將精液射入陰道內,經過孵育后,部分具有受精能力的成熟精子穿越宮頸,并通過宮頸粘液的理化作用,精子獲得授精能力,最終到達受精部位與卵子相遇并結合。在人工授精技術中,宮腔內人工授精(IUI)是最常用的授精方式,取代了陰道內人工授精(IVI)和宮頸內人工授精(ICI),直接將精子注入宮腔。該法繞過精子在陰道孵育、穿過宮頸粘液,經過自然篩選的環節。為了避免將精漿、非精子成分和劣質精子帶入宮腔,影響子宮腔的環境和受精。因此必須采用醫療手段,把優質的精子分離出來,并使精子獲能(受精能力,即使注入子宮腔的精子如同經過宮頸粘液選擇的精子一樣,獲得正常受精能力)。IUI精液處理最常用的方法有上游法和雙層密度梯度離心法,根據精液中精子的濃度、快速運動精子的百分比來選擇采用哪種方法。
一、上游法
上游法是將充分液化的精液加入試管底部,再沿管壁緩慢加入培養液,勿混,以大約45度傾斜放置,共同孵育一段時間,使活動能力好的精子游到上層培養液中,然后收集含精子的上層培養液,離心濃縮,調節精子濃度,即可用于IUI。優點在于操作簡便、成本低廉、不良反應少,并可獲得更低 DNA 碎片率的精子;缺點是精子回收率相對低,對于前向運動精子總數少、黏稠或不液化的精液不適宜采用上游法處理。
二、雙層密度梯度離心法
雙層密度梯度離心法是將高濃度梯度液加入離心管底部,在緩慢加入等體積的低密度梯度液,最后將液化好的精液緩慢加到最上層梯度液液面上。注意保持各層之間形成一個界面。經離心,優質精子沉淀到管底,再用精子培養液洗滌沉淀的精子后,調整精子濃度,備用。該方法可用于前向運動精子總數較少的精液。有研究認為,常規參數異常的精子經該法處理后,得到優選精子的頂體反應率、低滲腫脹試驗陽性率和核成熟的精子比例均優于上游法。另有研究表明,經DNA碎片率檢測發現,該法處理后的精子DNA完整性明顯高于經上游法處理的精子。
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